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免疫親和柱

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赭曲霉毒素A

型號/規格:ZYD-ZQMDSA
檢測項目:赭曲霉毒素A
產品用途:用于定性、定量檢測谷物、酒類等食品和飼料等樣本中的赭曲霉毒素A時的樣品前處理。
產品關鍵詞:赭曲霉毒素A 免疫親和柱

產品詳情

赭曲霉毒素A免疫親和柱操作說明書

【概要】

赭曲霉毒素A (Ochratoxin A)是曲霉屬和青霉屬的真菌形成的次級代謝產物,屬烈性的腎臟毒和肝臟毒,廣泛存在于各種食物中,谷物及其副產品是赭曲霉毒素A的主要來源。動物實驗表明攝入了被這種毒素污染的飼料后,會發生急性或慢性中毒癥。防止污染赭曲霉毒素A的食品和飼料直接或間接地進入人類食物鏈,加強對赭曲霉毒素A的檢測十分重要。


【適用范圍及性能】

用于定性、定量檢測谷物、酒類等食品和飼料等樣本中的赭曲霉毒素A時的樣品前處理。

柱容量:≥200ng

回收率:≥90%


【試驗原理】

本產品的測定的基礎是抗原抗體反應,赭曲霉毒素A單克隆抗體連接在柱內凝膠上,樣品中的赭曲霉毒素A經過提取、過濾、稀釋,然后將樣品提取液緩慢的通過赭曲霉毒素A免疫親和層析柱,在免疫親和柱內,赭曲霉毒素A與抗體結合,之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他物質。用甲醇洗脫赭曲霉毒素A,然后注入到分析儀器中用于檢測。


【包裝組成】

根據不同規格,每一個盒中包含5-25支赭曲霉毒素A免疫親和層析柱及1份說明書。


【需要而未提供的設備及試劑】

設備:

┅┅高速均質器或組織勻漿機

┅┅粉碎機

┅┅200ml/50ml量筒

┅┅天平:感量0.1g

┅┅微量移液器:單道 100?l~1000?l

┅┅槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)

┅┅玻璃微纖維濾紙(1.5?m孔徑)

┅┅50ml漏斗

┅┅一次性玻璃試管

┅┅泵流操作架(包括空氣泵,不同容積的玻璃注射器等)

試劑:

┅┅甲醇(色譜級)

┅┅蒸餾水或去離子水

┅┅pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(PBS緩沖液):稱取8.0g氯化鈉,1.2g磷酸氫二鈉,0.2g磷酸二氫鉀,0.2g氯化鉀,用990mL純水溶解,然后用濃鹽酸調節pH值至7.0,最后用純水稀釋至1000mL

┅┅清洗緩沖液:25g 氯化鈉+5g碳酸氫鈉+0.1mL吐溫-20

  用純水稀釋至1000 mL


【試劑配制】

樣品提取液:配制甲醇-水(8:2)溶液作為樣品提取液


【樣本處理步驟】

(一)花生,玉米,大米,小麥及其制品和飼料

┅┅稱取20g粉碎的樣品于100mL容量瓶中,加入5.0g氯化鈉,以甲醇-水(8:2)溶液定容;

┅┅轉移到均質杯中,以均質器高速攪拌,提取2分鐘;

┅┅4000r/min離心5min或用定量濾紙過濾;

┅┅取10mL濾液并加入40mLPBS緩沖液稀釋,用玻璃微纖維濾紙過濾,取過濾后液體待測;

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器;

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調節壓力使溶液以約1滴/S流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;

┅┅以10.0mL清洗緩沖液淋洗柱子1次,流速為1滴-2滴/S,棄去全部流出液,

┅┅再以10.0mL水淋洗柱子1次,流速為1滴-2滴/S,棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體;

┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,流速為1 滴/S,收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。


(二)啤酒,黃酒等酒類

┅┅取10mL試樣脫氣后與90mLPBS緩沖液混勻,用玻璃微纖維濾紙過濾,取過濾后液體待測;

┅┅將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器;

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調節壓力使溶液以約1滴/S流速緩慢通過免疫親和柱,直至2~3mL空氣通過柱體;

┅┅以10.0mL清洗緩沖液淋洗柱子1次,流速為1滴-2滴/S,棄去全部流出液,

┅┅再以10.0mL水淋洗柱子1次,流速為1滴-2滴/S,棄去全部流出液,并使2mL~3mL空氣通過柱體;

┅┅準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫,流速為1 滴/S,收集全

  部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。


【結果判定】

經免疫親和柱凈化后,收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測,也可使用薄層色譜或者酶聯免疫試劑盒進行檢測。收集到的1ml洗脫液中的赭曲霉毒素A含量相當于1g樣品中赭曲霉毒素A含量。


【注意事項】

┅┅赭曲霉毒素危害極大,應戴手套操作。

┅┅不要使用過了有效日期的免疫親和柱。


【貯藏條件及保存期】

貯藏條件:親和柱可于常溫保存,2-8℃儲存可延長有效期,不可凍存

保存期:該產品有效期為12個月。










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